植物叶绿素测定仪的实验步骤

植物叶绿素测定仪是用来测量叶绿素含量的仪器。它可以即时测量植物的相对叶绿素含量（单位SPAD）或“绿色程度”，从而了解植物的真实硝基需求量，帮助您了解土壤硝基缺乏情况。或者如果施用过多的氮肥。您可以通过此仪器，提高氮肥的利用率并保护环境。下面介绍植物叶绿素测定仪的实验步骤：

1.取新鲜的植物叶子（或其他绿色组织）或干燥的材料，擦去组织表面的污垢，剪碎（去掉中脉），拌匀。

2.称取0.2g新切好的样品，共3份，分别放入研钵中，加入少量石英砂、碳酸钙粉和2-3ml 95%乙醇，研磨成均质浆液，再加入10ml 乙醇，并继续研磨，直到组织变白。 静置 3 到 5 分钟。

3.取1张滤纸，放入漏斗中，用乙醇润湿，将提取液沿玻璃棒倒入漏斗中，过滤至25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，然后连同残渣一起倒入漏斗中。

4.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直到滤纸和残渣没有绿色为止。然后用乙醇定容至 25ml，摇匀。

5. 将叶绿体色素提取物倒入光径1cm的比色皿中。以 95% 乙醇为空白，在 665 nm 和 649 nm 波长处测量吸光度。

实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。然后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：

叶绿素含量（mg/g）=[叶绿素浓度×提取体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。